伏马毒素免疫亲和柱

伏马毒素（Fumonisin FB）是一种霉菌毒素，是由串珠镰刀菌产生的水溶性代谢产物，是一类由不同的多氢醇和丙三羧酸组成是结构类似的双酯化合物。伏马菌素有FA1、FA2、FB1、FB2、FB3等等，其中FB1是主要成分

1、用途：
免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的伏马毒素（ FB1、 FB2、FB3），从而对样品起到非常针对性的纯化作用，过柱 净化后的样品液，稀释后可直接用于LC-MS/MS分析或衍生 后用HPLC分析。
亲和柱与LC-MS/MS和HPLC配合使用可达到快速测定 的目的 ，以改善信噪比 ，可提高检测方法的准确度。

2、概述：
伏马毒素（Fumonisin）是由镰刀菌属产生的代谢产物， 具有急性和慢性毒性，且有种属特异性和器官特异性，研究  发现高浓度的伏马毒素可导致各种家畜和试验动物出现种  属特异性的急毒症状，如马脑白质软化综合征、猪肺水肿和  羊肝肾病变等，现在还发现伏马毒素可能与人的食管癌和肝  癌发生有关。

3、原理：

测定的基础是抗原-抗体反应 ，抗体连接在柱体内 ，样 品经过提取、过滤后，缓慢的通过伏马毒素免疫亲和柱，在 免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没 有被结合的其他无关物质。用洗脱液洗脱伏马毒素，然后注 入到分析仪器中或衍生后注入分析仪器中进行检测。

4、包装组成：

每一个盒中包括各种规格的伏马毒素免疫亲和柱及1份 说明书。

5、注意事项

----使用前 ，免疫亲和柱需回至室温（ 22～25℃) 。
----亲和柱2～8℃储存 ，不得冻存；冰箱内建议不要贴壁 放置 ，产品易冻 ，影响性能！
----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量 ，注意提取液量要相应改变。 
----当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时， 需要适当降低上样液的体积 ，重新检测。
----亲和柱的上样溶液pH需在6～8之间，若偏离此范围需 要用盐酸或氢氧化钠调节pH。
----上机检测时的溶剂与流动相保持一致可以消除溶剂效应的影响。
----伏马毒素对人体有害，应戴手套口罩等防护工具操作。 ----使用过的容器及伏马毒素溶液最好用次氯酸钠溶液  （5%V/V）浸泡24h以上。

6、配制溶液：

6.1 提取液 ：50%乙腈-水（含 1%乙酸）移取 500mL 乙腈 ，10mL 乙酸 ，加入 490mL 纯水。
6.2 PBS 缓冲液：称取 8gNaCl 、 0.2gKCl 、 0.2gKH2 PO4 和 1.16g Na2 HPO4  ·12H2O，加入 800mL 超纯水溶解并定 容至 1L。
6.3 稀释液（ 0.1%吐温-20/PBS 溶液）：取0.1mL 吐温-20，加入 PBS 缓冲液并定容至 100mL。
6.4 洗脱液：取 2mL 乙酸 ，加入 98mL 甲醇。
6.5 50%乙腈：取 50mL 乙腈 ，加入 50mL 水。

7、样品处理：

----25g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过 2mm分样 筛），加入 100mL 的提取液（见 6.1），混匀。
----高速均质(≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min ~ 300r/min）剧烈振荡 20min。
----用快速定性滤纸过滤；
----取 1.5mL 滤液加入 36mL 稀释液（见 6.3），振荡混匀； ----用微纤维滤纸过滤；
----取 20mL 上样液（相当于 0.2g 样品）用于过免疫亲和 柱净化。
稀释倍数 ：5

8、操作程序：

8.1 上样
----取出免疫亲和柱 ，将注射器筒的下端直接穿透亲和柱 上方的塞子 ，完成注射器筒与亲和柱的连接 ，将其放置在 气控操作架上进行固定；
----取适量步骤7中处理后的溶液 ，注入到注射器筒中；
----去掉亲和柱下方堵头 ，调节开关 ，使液体以1～2滴/ 秒的速度流出；
8.2 洗涤
----待液体排干；取10mLPBS缓冲液（见6.2）淋洗免疫 亲和柱 ，流速2～3滴/秒；
----再取10mL水淋洗免疫亲和柱 ，流速2～3滴/秒 ，并充 分排干；
8.3 洗脱

方法一：
----待液体排干后，更换新注射器，取洗脱液（见6.4）1mL/ 次 ，共三次 ，用玻璃试管接洗脱液 ，流速1滴/秒；
----每次上样洗脱液均需待液体排干；
----洗脱后液体于60℃下氮气吹干 ，残余物于4℃下存放， 使用时用50%乙腈0.5mL复溶 ，按国标（ GB5009.240—  2016）第一法衍生后检测，衍生时衍生液和复溶液比例是  1:1。
方法二：
----待液体排干后，更换新注射器，取洗脱液（见6.4）1mL/ 次 ，共2次 ，流速1滴/秒 ，收集洗脱液；
----每次上样洗脱液均需待液体排干；
----洗脱后液体用50%乙腈稀释到相应浓度 ， 按国标 （GB5009.240—2016）第二法检测
*每次上样前都要将上次液体完全排干。

9、结果判读：

方法一：伏马毒素的含量 =检测浓度×稀释倍数/2
方法二：伏马毒素的含量 =检测浓度×稀释倍数×洗脱液稀释倍数

10、贮藏条件及有效期：

贮藏条件 ：2～8℃。
有效期：该产品有效期为18个月。