伏马毒素 B1/ B2/ B3 免疫亲和柱说明书
发布时间：2024/04/11
伏马毒素 B1/ B2/ B3 免疫亲和柱说明书
1、用途：
免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的伏马毒素（FB1、FB2、FB3），从而对样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液，氮吹复溶后可直接用于LC-MS/MS分析或衍生后用HPLC分析。
亲和柱与LC-MS/MS和HPLC配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
2、概述：
伏马毒素（Fumonisin）是由镰刀菌属产生的代谢产物，具有急性和慢性毒性，且有种属特异性和器官特异性，研究发现高浓度的伏马毒素可导致各种家畜和试验动物出现种属特异性的急毒症状，如马脑白质软化综合征、猪肺水肿和羊肝肾病变等，现在还发现伏马毒素可能与人的食管癌和肝癌发生有关。
3、原理：
测定的基础是抗原-抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过伏马毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用洗脱液洗脱伏马毒素，然后注入到分析仪器中或衍生后注入分析仪器中进行检测。
4、包装组成：
每一个盒中包括各种规格的伏马毒素免疫亲和柱及1份说明书。
5、注意事项：
----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）。
----亲和柱2～8℃储存，不得冻存。
----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变。
----柱容量：
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毒素名称 |
柱容量（ng） |
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FB1 |
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FB2 |
5000 |
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FB3 |
----当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液的体积，重新检测。
----亲和柱的上样溶液pH需在6～8之间，若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调节pH。
----上机检测时的溶剂与流动相保持一致可以消除溶剂效应的影响。
----伏马毒素对人体有害，应戴手套口罩等防护工具操作。
----使用过的容器及伏马毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V）浸泡24h以上。
6、配制溶液：
6.1 提取液：50%乙腈-水（含1%乙酸）
移取500mL乙腈，10mL乙酸，加入490mL纯水。
6.2 PBS缓冲液
称取8gNaCl、0.2gKCl、0.2gKH2PO4和1.16g Na2HPO4·12H2O，加入800mL超纯水溶解并定容至1L。
6.3 稀释液（0.1%吐温-20/PBS溶液）
取0.1mL吐温-20，加入PBS缓冲液并定容至100mL。
6.4 洗脱液：取2mL乙酸，加入98mL甲醇。
6.5 复溶液：取50mL乙腈，加入50mL水。
7、样品处理：
----25g±0.01g样品（固体样品需粉碎，并过2mm分样筛），加入100mL的提取液（见6.1），混匀。
----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min。
----用快速定性滤纸过滤；
----取1.5mL滤液加入36mL稀释液（见6.3），振荡混匀；
----用微纤维滤纸过滤；
----取20mL上样液（相当于0.2g样品）用于过免疫亲和柱净化。
稀释倍数：5
8、操作程序：
8.1 上样
----取出免疫亲和柱，将注射器筒的下端直接穿透亲和柱上方的塞子，完成注射器筒与亲和柱的连接，将其放置在气控操作架上进行固定；
----取适量步骤7中处理后的溶液，注入到注射器筒中；
----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以1～2滴/秒的速度流出；
8.2 洗涤
----待液体排干；
----取10mLPBS缓冲液（见6.2）淋洗免疫亲和柱，流速2～3滴/秒；
----再取10mL水淋洗免疫亲和柱，流速2～3滴/秒，并充分排干；
8.3 洗脱
----待液体排干后，更换新注射器，取洗脱液（见6.4）1mL/次，共三次，用玻璃试管接洗脱液，流速1滴/秒；
----每次上样洗脱液均需待液体排干；
----洗脱后液体于60℃下氮气吹干，残余物于4℃下存放，使用时用复溶液（见6.5）0.5mL复溶，按国标（GB5009.240—2016）方法衍生后检测，衍生时衍生液和复溶液比例是1:1。
*每次上样前都要将上次液体完全排干。
9、结果判读：伏马毒素的含量=检测浓度×稀释倍数/2
10、贮藏条件及有效期：
贮藏条件：2～8℃。
有效期：该产品有效期为18个月。