黄曲霉毒素M1免疫亲和柱说明书
1、用途:
免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1,从而对样品起到非常针对性的净化作用,过柱净化后的样品液可直接用于HPLC分析。
2、概述:
黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物,也是一种强致癌物质。牛乳及其制品易受到黄曲霉毒素M1污染。
3、原理:
测定的基础是抗原、抗体反应,抗体连接在柱体内,样品经过离心、脱脂后,缓慢的通过黄曲霉毒素M1免疫亲和柱,在免疫亲和柱内毒素与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用乙腈洗脱黄曲霉毒素M1,然后注入到分析仪器中用于检测。
4、包装组成:每一个盒中包括各种规格的黄曲霉毒素M1免疫亲和柱及1份说明书。
5、注意事项:
----使用前,免疫亲和柱需回至室温(22~25℃)。
----亲和柱2~8℃储存,不得冻存。
----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
----取样量:根据需要可以适当增加或减少取样量,注意提取液量要相应改变。
----柱容量:100ng,当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时,需要适当降低上样液的体积
----pH:亲和柱的上样溶液pH需在6~8之间,若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调节pH。
----上机检测时的溶剂与流动相保持一致可以消除溶剂效应的影响。
----黄曲霉毒素M1可致癌,应戴手套操作。
----使用过的容器及黄曲霉毒素M1溶液最好用次氯酸钠溶液(5%V/V)浸泡过夜。
----当奶粉样品不易溶解时,可以在50℃下静置30min。若还不溶解则适当扩大溶解用的水的比例。
6、配制溶液:
7.1磷酸盐缓冲溶液(以下简称PBS):称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠(或2.92g十二水磷酸氢二钠)、0.20g磷酸二氢钾、0.20g氯化钾,用900mL水溶解后,用盐酸调节pH至7.4,再加水至1000mL。
7、样品处理:
方法一:液态奶、酸奶
----称取4g混合均匀的试样(精确到0.001g)于50mL离心管中,加入10mL乙腈,涡旋3min。
----置于4℃、6000r/min下离心10min或经玻璃纤维滤纸过滤,
----取7mL上清液或滤液转移至离心管中,加40mL水稀释,备用。
稀释倍数:0.5
方法二:乳粉、特殊膳食用食品
----称取1g样品(精确到0.001g)于50mL离心管中,加入4mL50℃热水,涡旋混匀。如果乳粉不能完全溶解,将离心管置于50℃的水浴中,将乳粉完全溶解后取出。待样液冷却至20℃后,加入10mL乙腈,涡旋3min。
----置于4℃、6000r/min下离心10min或经玻璃纤维滤纸过滤
----取7mL上清液或滤液转移至烧杯中,加40mL水稀释,备用。
稀释倍数:2
方法三:奶酪
----称取1g已切细、过孔径1mm~2mm圆孔筛混匀样品(精确到0.001g)于50mL离心管中,加入1mL水和14mL乙腈,振荡30min,
----置于4℃、6000r/min下离心10min或经玻璃纤维滤纸过滤,
----将10mL上清液或滤液转移至圆底烧瓶中,
----旋转蒸发至2mL以下,用PBS稀释至30mL。
稀释倍数:1.5
8、操作程序:
----取出免疫亲和柱,1mL的免疫亲和柱:将上方塞子取出剪断,再插回亲和柱上;(3mL的免疫亲和柱:采用转接头与注射器针筒连接。)
----将柱子与气控操作架上的注射器连接固定,取全部步骤8中处理后的溶液上样;
----去掉亲和柱下方堵头(洗脱需使用,无丢弃),调节开关,使液体以1~2滴/秒的速度流出;
----待液体排干后,用蒸馏水或去离子水洗涤10mL,流速2~3滴/秒;
----待液体排干后,更换新针筒,取洗脱液甲醇1mL/次,共4次,用刻度试管接洗脱液,流速1滴/秒;
----洗脱后液体用氮气在50℃条件下吹至近干;
----用初始流动相溶解并定容到1ml;----洗脱液用0
.22μm微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于HPLC分析。
* 每次上样前都要将上次液体完全排干。
* 也适用于GB 5009.24-2016。
9、结果判读:黄曲霉毒素M1 的含量=检测浓度×稀释倍数
10、贮藏条件及有效期:
贮藏条件:2~8℃
有效期:该产品有效期为 12 个月。